細(xì)菌涂片及細(xì)菌染色是微生物學(xué)的基本技術(shù)，也是觀察細(xì)菌更簡(jiǎn)單且行之有效的方法，是微生物檢測(cè)人員常用技能之一。通常情況下，由于細(xì)菌個(gè)體較小，較透明或半透明，如未經(jīng)染色往往不以觀察識(shí)別。因此借助于染色法可以使細(xì)菌著色，與視野背景形成鮮明對(duì)比，從而易于在顯微鏡下進(jìn)行觀察。

微生物檢測(cè)常見的細(xì)菌染色方法包括簡(jiǎn)單染色、負(fù)染色、革蘭氏染色、芽孢染色法、鞭毛染色、莢膜染色、死活染色。制備細(xì)菌染色片一般要經(jīng)過涂片、固定、染色、水洗、干燥等步驟，然后用微儀顯微鏡觀察。

1. 簡(jiǎn)單染色：

在實(shí)驗(yàn)室微生物檢測(cè)過程中，不同細(xì)菌或者由于觀察者所側(cè)重觀察的內(nèi)容不同，所以使用的染料也有差異，但是簡(jiǎn)單細(xì)菌染色的方法是一樣的。

先按照上述的制片方法制片，制成需要觀察的玻片后，使用相對(duì)應(yīng)的染料滴加到玻片上的菌膜區(qū)域，以覆蓋菌膜為準(zhǔn)。按照不同染料的要求，結(jié)合所觀察的內(nèi)容確定染色時(shí)間，染色時(shí)間到達(dá)時(shí)，進(jìn)行水洗，干燥等步驟。更后得到的玻片加蓋蓋玻片即可進(jìn)行鏡檢。如有需要可以后續(xù)再進(jìn)行油封、蠟封等封片過程。簡(jiǎn)單細(xì)菌染色過程如下圖：

2. 負(fù)染色

制備觀察圖片是非常容易的，但是對(duì)微生物檢測(cè)初學(xué)者來說想要在玻片中找到目標(biāo)菌還是有一定難度的，因?yàn)榧?xì)菌常常無(wú)色透明且比較小，所以對(duì)初學(xué)者來說除非對(duì)光圈等進(jìn)行很精細(xì)的調(diào)節(jié)，否則很難觀察到目標(biāo)菌，因此進(jìn)行負(fù)染色就十分重要。該方法是將微生物與苯胺黑或者墨水混合，再將混合物覆蓋于載玻片表面，由于這兩種天然黑色染料不能滲入微生物細(xì)胞，所以使得透明的微生物個(gè)體在黑色的背景下很容易觀察。負(fù)染色法常見有兩種操作方法。

**種發(fā)個(gè)方法比較常見，在一個(gè)載玻片上將微生物與異地苯胺黑混合，用另外的載玻片將混合物均勻的覆蓋于原來的載玻片上。該方法的目的是使混合物在在玻片上一邊厚一邊薄，在厚與薄中間的額區(qū)域就是更佳觀察區(qū)域。如圖所示：

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文章來源：環(huán)凱微生物